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第一篇　生物化学与分子生物学实验基本技术第一章　生物化学实验基本操作1

第一节　实验室规则1

第二节　基本实验操作2

一、玻璃仪器的清洗2

二、玻璃仪器的干燥2

三、特殊污物的清洗2

四、塑料器皿的清洗2

五、刻度吸管的使用3

六、可调式微量移液器的使用3

七、溶液的混匀、加热、保温及冷却4

第三节　常用实验仪器的使用5

一、LD5-2A离心机的使用方法5

二、722型分光光度计的使用方法5

三、752紫外光栅分光光度计的使用方法6

第四节　常用实验标本的制备7

一、血液样本的收集7

二、尿液样本的收集与保存7

三、组织样品的制备8

第五节　实验报告的书写10

一、实验报告基本格式10

二、书写实验报告应注意事项10

第二章　分光光度技术11

第一节　基本原理11

一、光的一般知识11

二、发射光谱与吸收光谱12

三、朗伯-比尔定律12

第二节　分光光度计的结构13

一、光源14

二、分光系统14

三、狭缝14

四、吸收池15

五、检测系统15

第三节　分光光度技术的应用15

一、用于溶液中物质的定量测定15

二、用于溶液中物质的定性测定16

第三章　电泳技术17

第一节　基本原理17

一、电泳的概念17

二、电泳的主要影响因素17

第二节　电泳的分类19

一、按分离目的分类19

二、按分离原理分类19

三、按支持介质分类19

四、其他分类20

第三节　常用电泳技术20

一、纸电泳20

二、醋酸纤维素薄膜电泳20

三、琼脂糖凝胶电泳21

四、聚丙烯酰胺凝胶电泳21

五、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳22

六、等电聚焦电泳23

七、双向电泳24

八、毛细管电泳24

九、特殊电泳25

第四章　层析技术26

第一节　基本知识26

一、层析的基本概念26

二、层析技术的分类26

三、层析的基本原理26

第二节　离子交换层析27

一、基本原理27

二、离子交换介质28

三、分离过程29

四、离子交换层析的应用30

第三节　凝胶层析30

一、基本原理30

二、常用凝胶31

三、凝胶层析的应用32

第四节　亲和层析33

一、基本原理33

二、基质与配体的选择33

第五节　高效液相色谱35

一、基本概念35

二、基本装置35

第五章　离心技术38

第一节　基本原理38

一、离心力38

二、相对离心力39

三、沉降系数39

第二节　离心机的类型39

一、制备性离心机39

二、分析性离心机41

第三节　制备性超速离心的分离方法41

一、差速沉降离心法41

二、速度区带离心42

三、等密度离心42

第四节　离心操作的注意事项42

第六章　透析技术44

第一节　透析原理及影响因素44

第二节　透析技术的应用45

第三节　透析操作及注意事项45

第七章　生物大分子制备47

第一节　细胞破碎及细胞器分离47

一、细胞破碎47

二、细胞器分离48

第二节　生物大分子的分离与纯化49

一、蛋白质（酶）的分离与纯化49

二、核酸的分离与纯化53

第三节　提纯后的处理54

一、样品的浓缩54

二、样品的干燥及贮存55

第八章　分子生物学基本技术原理56

第一节　核酸分子杂交56

一、核酸分子杂交的基本理论56

二、核酸分子探针57

三、核酸分子杂交的种类与方法60

第二节　DNA克隆技术基本原理63

一、获取目的基因64

二、构建基因载体65

三、限制性内切核酸酶的作用68

四、DNA分子重组70

五、重组DNA分子导入宿主细胞70

六、阳性重组体的筛选和鉴定71

七、克隆基因的表达72

第三节　聚合酶链反应74

一、基本原理与方法74

二、PCR技术的应用75

第二篇　生物化学与分子生物学教学实验第九章　基本理论实验77

实验一　蛋白质的沉淀、变性及等电点的测定77

一、蛋白质的沉淀与变性77

二、蛋白质等电点的测定80

实验二　理化因素对唾液淀粉酶活性的影响81

实验三　琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用84

实验四　脂肪酸的β-氧化作用——酮体的生成和利用85

实验五　血清丙氨酸氨基转移酶活性测定（赖氏法）88

第十章　基本技术实验91

实验六　蛋白质的透析91

实验七　蛋白质的定量测定（一）：酚试剂法（Lowry法）92

实验八　蛋白质的定量测定（二）：紫外分光光度法95

实验九　血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳96

实验十　血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳99

实验十一　SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量102

实验十二　肌肉组织氨基移换作用（纸层析法）105

实验十三　胡萝卜素的柱层析分离108

实验十四　细胞核的分离与纯化110

第十一章　综合强化实验114

实验十五　激素对血糖浓度的影响114

一、血糖的定量测定——葡萄糖氧化酶法114

二、胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响115

实验十六　血清γ-球蛋白的分离、纯化及鉴定117

实验十七　核酸的制备及测定121

第十二章　分子克隆技术基础实验128

实验十八　质粒DNA的提取（碱裂解法）128

实验十九　限制性核酸内切酶对质粒DNA的酶切作用130

实验二十　DNA的琼脂糖凝胶电泳132

实验二十一　感受态细菌的制备及质粒DNA的转化135

实验二十二　核酸的分子杂交137

实验二十三　聚合酶链反应体外扩增DNA（PCR）140

第十三章　学生设计性实验144

第一节　设计性实验概述144

一、设计性实验的概念144

二、医学科学研究的类型和医学实验的要素144

三、学生设计性实验的基本程序145

第二节　设计性实验的选题和设计145

一、设计性实验的选题145

二、实验设计146

第三节　数据的记录与处理149

一、实验研究的观察记录149

二、实验数据的处理150

第四节　实验报告和论文的撰写151

一、实验报告的撰写151

二、科研论文撰写153

第五节　设计性实验教学组织案例155

第三篇　生物化学与分子生物学常用资料及数据第十四章　化学试剂分级及注意事项157

第一节　一般化学试剂的分级157

一、化学试剂的分级157

二、易变质及需要特殊方法保存的试剂158

第二节　试剂配制的一般注意事项158

第十五章　常用试剂配制159

第一节　生物化学与分子生物学实验中常用试剂的配制159

一、有机试剂的配制159

二、细菌培养基和抗生素的配制159

三、生化实验中常用缓冲液配制161

四、常用电泳缓冲液162

五、常用凝胶上样缓冲液的配制162

六、常用贮存液的配制163

七、细菌的保存165

第二节　重铬酸洗液的配制与再生165

附录　常用的生物化学与分子生物学相关网站167

一、国内网站167

二、国外网站167

参考文献169